Tespit ROS GSH Düzeyleri Nasıl Kullanılır

Glutatyon, ya da GSH , sistein , glutamat ve glisin yapılan elzem olmayan bir tripeptide . Vücuttaki çeşitli metabolik süreçlerin sonucu olarak moleküler oksijen oluşturulmaktadırROS zararlı etkileri ya da reaktif oksijen türlerinin, vücudun hücreleri ve organları , koruyan güçlü bir antioksidandır. Glutatiyon gibi antioksidanlar ,ROS ve onları nötralize ile etkileşim ve hücrelerdeDNA ve protein zarar vermesini engeller. Vücudunuzdaki GSH okside ve düşük formununoranı Sen santrifüj
Sodyum heparin
Syringe
Kelebek iğne
ihtiyacınız olacak sizin body.Things deROS - oksidatif strese bağlı göstergesidir> sülfosalisilik asit Daha Talimatını göster

GSH standart çözelti
GSH Reaksiyon Agent
MICROPLATE
Işık kaynağı
Dondurucu 1 Berabere

yaklaşık 2 bir 5 ml şırıngaya bağlanmış bir 23 gog kelebek iğne ile anticubetal ven delme ile kan ml. Sodyum heparin ihtiva eden tüpler test hafifçe karıştırma tüpü ters için örnek ekleyin .
2P beş dakika boyunca dakikada 2500 devirdesantrifüj ile örnek kırmızı kan hücrelerini toplamak. Dondurma ve hücreleri kırmak için bir numune üç kez eritin. 12,000 rpm'de 10 dakika 4 ° için hücre lisatı solüsyonu santrifüj ve supernatant toplamak .
3

yüzde 5 sülfosalisilik asit ekleyerek ve enörnek santrifüj ile numunedenproteini çıkarın 4 derecede beş dakika süreyle 12,000 rpm . -112 Derecegiderildi süpernatan saklayın.
4

bir tiyol saptama maddesi , GSH redüktaz ,GSH , reaksiyon karışımı yapmak için kit üretici tarafından belirtilen oranlarda nikotinamid adenin dinükleotid fosfat ve deney tamponu karıştırın. Her kimyasalmiktarı gerçekleştirmek niyetinde testlerinsayısına bağlıdır . 16, 32 , 63, 125, 250 ve 500 mikrolitre konsantrasyonlarını elde etmek için yüzde 5 sülfosalisilik asit içindeGSH reaksiyon karışımı seyreltin.
5

kuyularagiderildi kan örneğinin 1-10 mikro litre ekle bir mikroplaka . 10 mikrolitre de her birinin toplam hacmi getirmek için her bir oyuğa ,test kiti kullanılabilir seri halinde seyreltilmiş GSH standart solüsyonu ekleyin.
6

yapılan GSH Reaksiyon karışımının 90 mikrolitre ekleme de bir mikrolevhadaki her için Adım 4'te . 30 saniye için plaka sallayarakreaktif karıştırın.
7

405 ve 415 nanometre dalga boyu ışık altında,plaka yerleştirerek hemen absorbansı ölçülür. 30 dakika boyunca inkübe edin. İnkübasyon sırasında her beş dakika sonra absorbans değerlerini alınız.
8.

yüzde 5 sülfosalisilik asit ve trifluromethane sülfonat çözeltisi ileişlenmiş örnek sulandırır 6. millimolar . Bu çözeltiden tüm indirgenmiş GSH kaldırır. Mikroplaka kuyulara bu çözeltinin 10 micoliters 1 ekleyin ve adım 5 , 6 ve 7 yineleyin. Bu örnekteki okside GSH miktarını tahmin yardımcı olacaktır.
9

absorbansı ve örnek Plot Her iki indirgenmiş ve oksitlenmiş glutation için GSH eğrisi elde etmek için , bir grafikte konsantrasyonu . GSH iki biçimleri arasındakioranını hesaplayın. Artmış seviyeleri GSH oksidatif stres ve ROS işaret oksidatif .