Nasıl Asma Bırak Hazırlanır

Bir proteinin3D yapısını belirlemek için , öncelikle bu saf kristal gerekir . Asılı bırakma yöntemi, bir lamel protein ihtiva eden çözelti, asılı bir damla kullanılır. Bu asılı damla damla altındadaha yüksek bir tuz konsantrasyonuna sahip bir hazne bulunur. Zamanla, su buharıdamla çıkar ve protein kristalleşmesine neden , rezervuar içinde biter . Her protein farklı ( örneğin tuz konsantrasyonu ve pH gibi ) koşulları ve sık sık deneme ve hata Sen pipet ile MİKROPİPETİ
Lab ceket , eldiven ve koruyucu gözlük ihtiyacınız olacakdoğru conditions.Things bulmak içintek yol sunar gerektirir ipuçları şırınga
1. 0,05 mol asetat tamponu içinde sodyum klorür çözeltisi mol , pH 4,7 Sayfa 2 ml Eppendorf tüpleri ( veya benzeri)
santrifüj
24 oyuklu plakanın
Vakum yağ
Silikonlu lamel
Basınçlı hava
cımbız
Kil (örneğin, modelleme kil veya benzeri) , 0.05 mol asetat tampon çözeltisi içinde daha fazla komutun ABS
pH 4,7
<50 mg /ml lizozim
brs>
1

laboratuvar dişli ( ceket , eldiven ve göz koruması ) üzerine koyun .
2

içine sodyum klorür (tuz ) ve asetat tampon çözeltisi , 1.1 mL eklemek için bir mikropipet kullanın , bir Eppendorf tüpü.
3

Santrifüj 13,000 rpm'de beş dakika içindekituz çözeltisi ile kapalı Eppendorf tüpü. Tuz solüsyonu tüpe karşısında ve zıt su 1.1 mL içeren başka bir eppendorf tüpüne yerleştirereksantrifüj dengelemek için unutmayın.
4

24 oyuklu bir oyuğa 1 ml tuz çözeltisi ekleyin plakası.
5

de bu jantı etrafında ince bir yağ tabakası yerleştirmek için bir yağ - doldurulmuş şırınga kullanın. Çok az veya çok fazla eklememek için özen gösterin. Eğer çok fazla yağ eklerseniz ,gres aşağıkuyuya çalıştırın ve muhtemelen denemenizi berbat olacak . Eğer çok az kullanırsanız ,iyi hava geçirmez olmayacak ve deneme çalışmaz . Lamel ve gres sonra hava geçirmez bir mühür formu yeterli gres hedefliyoruz .
6

dört küçük topları yapmak için ellerinizlekil Rulo ve24-dört köşe üzerine onları itmek serpildi. Lamel ile temas etmezplakakapağını sağlamak için destekler Onlar hareket edecektir .
7

kullan basınçlı havalamel kapalı tozları üflemek için .
8

. Temiz bir cımbız ilelamel tutun sizin mikropipet ilelizozim çözeltisinin 4 mikrolitre Suck , velamelmerkezine bu çözüm ekleyin. Pipet uçları değiştirin ve tuz çözeltisi 4 mikrolitre ekleyin. Yavaşça lizozim çözeltisi ile tuz çözeltisi karıştırmak , sonra atılması sıvı emme , yukarı ve aşağı pipet ve . Tümlamel üzerindesıvı dağıtma olmadanikisini karıştırmak için özen gösterin.
9

akışkan kapalı slayt değil öylesine hızlalamel çevirin , ve dürüstçede üstüne santrali . Tümiyi kenarlarındagres ile hava geçirmez bir mühür oluşturur bu yüzden hafifçe basın dikkat edin.
10

kil topları üzerine24 -plakakapağını itin ve bırakın serin bir yerdeplakası.