Bitki yapraklarından DNA ayıklayın Nasıl

Bitki organik madde büyüme ve fonksiyon içintalimatları tutarDNA içeren her biri birçok hücre , oluşur . Bilim adamları bölümünü veyahücrelerdegenetik materyal mevcut tüm öğrenim görmek isteyen ve böylece güvenle Sen
2 gram ihtiyacınız olacak it.Things çevreleyenyapısal malzeme ve hücre makine gelenDNA
yaprakları ayıklamak gerekebilir Pestle ve santrifüj
su banyosunda
Balance
tülbent
Altı 15ml santrifüj tüpleri
harç
100ml CTAS Ekstraksiyon
2ml Beta - merkaptotanol
7ml 24 : 1 kloroform: izoamilalkol kanşımı 10 mg bir konsantrasyonda RNAse A 50 mikrolitre
/ml
Pipetler steril deiyonize su
1ml
% 70 Etanol 2ml
6ml izopropanol göster
Daha Talimatları 1

her üreticinin özelliklerine göre değişir su ileönerilen düzeyesu banyosu doldurun
ve açın
. 65 santigrat derecesu banyosu ayarlayın ve sıcaklığına gelip izin . Buz üzerindeizopropanol kap yerleştirin. 20 santigrat derece sıcaklıkta dakikada 3.000 devirdesantrifüj ayarlayın .
2

2 gr bir denge üzerine bırakır tartılır ve bir harç içine yerleştirin . Böylece nihai ürün , beta- merkaptoetanol 1:59 oranında oluşur ekstraksiyon tamponu , bir kaba pipetiyle kadar p -merkaptoetanol ekleyin. Eğer 100 ml tampon ile ilgili ölçen bir hacme sahiptir , örneğin , daha sonra kaba 2 ml beta -merkaptoetanol ekleyin ve iyice karıştırın.
3

Pipet 7 ml ekstraksiyon tamponuharca . Havan tokmağı ile homojen bir sıvı karışımı içine ezmek .
4

dört katman oluşturmak için tülbent üzerinde bir parça katlayın. Süzün ve bir 15 - ml santrifüj tüpü içine katmanları üzerinden suyu sıkın.
5

30to 60 dakika utes için su banyosu içine tüp yerleştirin. Bir saat onun içeriği her çeyrek karıştırmak içintüp çalkalanır. Tam süre kadar sonra, kloroform ve izoamilalkol karışımı ( bu, bir parçası izoamilalkol 24 parça kloroform içerir) ile
6

En yukarıtüp .Tüp oda sıcaklığına kadar soğumasını bekleyin , böylece tüp kabaca yarısıörnek ve yarımyeni sıvı eklenmesini içeriyor . Tüp kap vesıvı karışımları çok yavaş baş aşağı birkaç kez çevirin .
7

santrifüjtüpü koyun ve 10 dakika boyunca spin izin .
8

yeni bir santrifüj tüpüne bir yer 50 ml RNase a . Off ilk tüp süpernatant ( enkaz beyaz bir tabaka üzerindeki borunun üstaçık tabakası) Pipet veikinci tüpe doğru hareket ettirin. Tüp kap ve birlikteiçeriğini karıştırmak için bunu bir kaç kez ters çevirin. . Bir saat boyunca oda sıcaklığında tüpü tutmak net bir örnek tüp zorunda
9

iki kez tekrar adım 6 ve 7 gerçekleştirin. Daha sonra yeni bir tüpeson tüpten berrak sıvı , 9 ml kadar pipetle. 6 mi izopropanol ilave ve DNA çözeltiden ve katı bir forma düşecek şekilde yumuşak bir şekildeboruları 10 kez ters çevirin. Daha sonra tüpün alt DNA bir pelet yaratmalıdır 10 dakika boyuncasantrifüj tüpü .
10

pelet kalacak şekilde boru içindesıvı dökün . Tekrarsantrifüj içinde beş dakika boyunca 2 mL % 70 etanol ve yerine Pipet . Yine sıvı kısmının dökün . Pelet pick up ve steril 1.5 ml Eppendorf tüp taşımak için steril bir pipet kullanın . Steril deiyonize su içinde 200 mikrolitre Pipet ve DNA, bir gece boyunca sunarsıvı içinde tamamen çözülür sağlar. Numune, daha sonra analiz için hazır hale gelir.