PVDF için yöntemler Protokolü kurutma

nükleik asitler veya proteinler bağlayıcı olduğunda, PVDF (polivinil diflorür ) olarak adlandırılan bir zar yüksek bağlayıcı maddeantikorlar için destek sağlar. Western lekelemesi yoluyla, zarlar birlikte istiflendiğindeantikor için hazırlanır ve daha sonra kurutulmuştur. Zarın kurutulması için Protokolü Membranlar nasıl bilgi, katot tabak, anot plakaları ve metanol çözeltilerin uygulanmasını gerektirir. Doğru protokolü ile , zar güvenli bir şekildespesifik bir antikor ile bağlanan ve hemen kullanım veya depolama için hazır hale gelir.

PVDF membran hazırlamaMembran hazırlanması temizler vetransferden öncemembran stabilize . Kurutma öncesi , zar " bloke " dir Bu tür spesifik olmayan antikorlar gibiözel nükleik asitler dışındaki bir şey bağlanmasını engellemek için . Bu prosedür sırasında, metanol kaplı düz bir yüzey üzerine koyarakzarı ıslak . Membran opak yarı saydam için , bu ifade sırasında renk değiştirir . Bir kez metanol banyosu ile bitmiş , zar , yaklaşık iki dakika boyunca emmek için deiyonize su içinde yerleştirilir. Membran sonra yüksek asidik bir metanol çözeltisi içinde tekrar emmek zorundadır . Membranlarının
Meclisi Transferimembran kağıtları

İkiilk metanol solüsyonu batırılmış önce ve bir anod plaka üzerine yerleştirilir . Bu işlem sırasında , dikkatlitransferi tehlikeye düşüren , hava kabarcığı için kontrol etmelisiniz . Filtre kağıdı başka bir parça , ikinci metanol çözeltisi içinde ıslatılmış ve yığının üstüne yerleştirilir . Bir Jel daha sonra değiljel uygulama ve membran arasında tuzak hava kabarcıkları için özenle , zarın üstüne gider . Kağıt üç yeni parçalar daha sonra bir katot tamponu içinde ıslatılmış ve jelin üzerine yerleştirilir. Herhangi bir hava kabarcıkları oluşursa , bir test tüpüzarlarını düzeltmek için çalışır.Sürecinin bu bölümünde
Transferi

, yüksek gerilim bağlamak bir güç kaynağına ve 30 dakika boyunca zar üzerindejel bölgeye bir sabit akım kabloları uygulanır . Aktarım kez antikorun tipine bağlı olarak değişir . 30 dakika sonra,güç kaynağı ve aktarma membran kaldırmak . Membranın alt sağ köşesinde sonra yönünü kontrol etmek için kesilir. Filtre kağıdı ilk iki tabakajel de dahil olmak üzere atılır. Moleküler ağırlığıbantları bir tükenmez kalem ile işaretlenmiştir .
Kurutma

transferi tamamlandıktan sonra, iki yoldan biriylemembran kurutun. Daha hızlı kurutma için , zar suyu çıkarmak için 10 saniye boyunca yüzde 100 , metanol içinde ıslatılır. Zar daha sonra 15 dakika boyunca kağıt havlu bir parçası üzerinde durmaktadır. Daha düşük bir kurutma yöntemi için, membran metanol eklemeden kağıt havlu üzerine yerleştirilir. Kuruduktan sonra , zar, ileride kullanılmak üzere 4 ° C olarak kullanılabilir veya kuru bir kap içinde muhafaza edilebilir.